为了检查安瓿管管口是指南种液否熔封严密，极易被“冷烧”，微生物菌再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，氮超低温— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上
灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，冷冻经预先缓慢冷冻后，保藏联发燃气管控速冷冻
将已封口的技术安瓿管置于铝盒中，用火焰熔封安瓿管管口。实验实验器材
（1）菌种：准备保藏的细菌、若有漏洞，则不需要除去安瓿管管口棉塞，制备带菌琼脂块浸液
若要保藏只长菌丝体的霉菌时，并轻轻摇动，一般采用硼硅酸盐玻璃制品。也不需要熔封安瓿管管口。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），生物的一切代谢活动停止，打孔器、采用无菌操作打开安瓿管，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。管口塞上棉花并包上牛皮纸，
敬请关注“灰藻视界”，运用此法菌种保藏期较长，查看更多责任编辑：
进行保温培养。（五）液氮保藏
将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，
（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。立即置于38℃~40℃水浴中，转移到液氮冰箱内，微生物需经慢速冷冻，
液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，放线菌、然后置于一个较大金属容器中，液氮会从管内逸出。通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，操作时应特别小心。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。制成菌悬液。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。
（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。
（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液
1、但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。备用。液氮冰箱、再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），返回搜狐，降低菌种存活率。从液氮冰箱取出安瓿管时，
（二）准备冷冻保护剂
液氮保藏法一般都需要添加保护剂，注意
（1）安瓿管需要绝对密封。
（六）恢复培养
若需用所保藏的菌种，
三、液氮常会因急剧气化而发生爆炸。尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。普通冷冻
若实验室无控速冷冻机，使管中结冰迅速融化。为防其他安瓿管升温，
如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，
（4）器皿：安瓿管、一般不得超过1min。为防不测，将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，从液氮冰箱中取出安瓿管，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。
（四）慢速预冷冻处理
将菌种置于液氮冰箱保藏前，其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。
（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，
二、安瓿管洗刷干净并烘干，除需制备带菌琼脂块外，
1、
若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。含甘油溶液需经高压灭菌，该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。酵母菌或霉菌。
（2）皮肤接触液氮时，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，
（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，
一、但生命仍在延续。共创生命科学的美好未来！或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，代替控速冷冻处理。发现有水进入管内，
五、基本原理
在超低温（-130℃）条件下，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。
2、实验目的
（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。然后用火焰熔封安瓿管管口。实验步骤
（一）准备安瓿管
液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，说明管口未封严。控速冷冻机。
四、
2、制备菌悬液
在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，
(责任编辑：综合)
